1.实验原理

1.实验原理

由一个克隆B细胞产生的、只针对某单一抗原表位的高度特异性抗体称为单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）。由杂交瘤技术制备的单克隆抗体又称第二代人工抗体。1975年， Kohler和Milestein利用杂交瘤技术首次制备了单克隆抗体。其原理如下：经抗原免疫的小鼠，其B细胞具有合成和分泌特异性抗体的能力，但体外不能长期传代，而小鼠骨髓瘤细胞虽不能分泌抗体，但可以在体内、体外长期传代。基于此，将免疫小鼠的脾细胞（B细胞）和同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合，便可形成既能产生特异性抗体，又能在体外传代培养的杂交瘤（hybridomas）细胞。由于一个杂交瘤细胞是由一个B细胞融合产生的，所以一个杂交瘤细胞增殖所形成的细胞群称单克隆群体，所产生的抗体是仅能识别一种抗原表位的单克隆抗体。

 

图1. 单克隆抗体制备流程

小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞在融合剂的作用下，经过HAT选择性培养基筛选后，未融合的脾细胞因不能体外传代而死亡，未融合的骨髓瘤细胞因HAT培养基中存在氨基蝶呤，使其DNA的合成途径被阻断也不能存活，仅融合成功的杂交瘤细胞因获得了脾细胞所具有的产生次黄嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）的能力，可以在HAT培养基中存活增殖，并在体内外大量分泌单克隆抗体。

2.知识点数量：  7  （个）

1.小鼠准备及免疫。

2.骨髓瘤细胞的准备。

3.小鼠滋养细胞、脾脏B细胞的获取。

4.B细胞与骨髓瘤细胞的融合。

5.融合细胞的鉴定和筛选。

6.单克隆抗体的大量制备。

7.单克隆抗体的纯化及效价检测